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如何看待固相萃取的常见故障和解决办法

发布时间:2022-11-08      点击次数:221
  固相萃取是一种样品预处理技术,由液固萃取和柱液相色谱技术相结合发展而来,主要用于样品的分离、纯化和浓缩。与传统的液液萃取法相比,可以提高分析物的回收率,更有效的将分析物与干扰组分分离,减少样品预处理过程,操作简单、省时、省力。
  可是,用户在使用固相萃取小柱过程中也会遇到各种各样的问题。以下是总结使用过程中常见问题及解决办法。
  · 目标化合物回收率偏低(目标化合物没有或部分被吸附在SPE柱上)
  原因1:SPE柱没有很好地被预处理
  解决方法:反向柱:用甲醇,异丙醇或乙醇处理柱子,然后用稀释样品的溶剂处理柱子,注意不能让SPE柱变干。
  原因2:SPE柱的极性不合适
  解决方法:选择对目标化合物有明显选择性的SPE柱。
  原因3:目标化合物对样品溶液的亲和力远远大于对SPE柱的亲和力
  解决方法:改变极性或样品溶液的pH使目标化合物在样品溶液中的亲和力降低。
  原因4:当大体积水样品通过SPE柱时,反相柱填料失去柱子预处理留下的甲醇
  解决方法:在样品溶液中加入1%-2%的甲醇或异丙醇或乙腈。
  · 洗脱馏分中含有干扰物
  原因1:干扰物与目标化合物被同时洗脱
  解决方法1:在洗脱目标化合物之前选用中等极性的溶剂将干扰物洗涤出SPE柱。可将两种或更多种的溶剂混合以达到不同的极性。
  解决方法2:选用对目标物化合物亲和力更大而对干扰物亲和力低的SPE柱。
  原因2:干扰物来自SPE柱
  解决方法1:用两根不同极性的SPE柱以除去干扰物。如反相柱和离子交换柱或硅胶柱。
  解决方法2:在柱子预处理之前用洗脱溶剂洗涤SPE柱。
  · 目标化合物回收率偏低(目标化合物没有被洗脱出SPE柱)
  原因1:SPE柱的极性不合适
  解决方法:选择其他低极性或者选择性弱的SPE柱。
  原因2:洗脱溶剂不够强,无法将目标物化合物从SPE柱上洗脱
  解决方法:改变洗脱溶剂的pH以增加其对目标化合物的亲和力。
  原因3:洗脱溶剂体积太小
  解决方法:增加溶剂体积。
  原因4:目标化合物被不可逆地吸附在SPE载体上
  解决方法:反相:选择疏水性弱的载体。如果原来用的C18,则改为C8,C2,CN。
  阳离子交换:用羧酸取代苯磺酸。
  阴离子交换:用伯胺、仲胺代替叔胺。
  · 萃取重现性差
  原因1:在添加样品之前SPE柱已干燥
  解决方法:重新进行SPE预处理。
  原因2:SPE柱超容量
  解决方法:减少样品量或选择大容量柱。
  原因3:样品过柱流速太快
  解决方法:降低流速。
  原因4:洗脱液流速太快
  解决方法:在使用外力之前让洗脱液渗透过柱。两次5ml洗脱可能比一次10ml,更有效。
  原因5:目标化合物在样品中的溶解度太大,样品过柱时与样品同时通过柱子而没有被保留
  解决方法:通过改变样品极性或pH而改变目标化合物的溶解度。
  原因6:SPE柱用极性溶剂处理而洗脱剂是不兼容的非极性溶剂
  解决方法:在使用非极性溶剂之前对SPE柱进行干燥。
  原因7:洗涤杂质用的溶剂太强,部分目标化合物与杂质同时被从SPE柱洗脱。目标化合物在这一步损失的多少取决于洗涤溶剂的流速,SPE的特性以及洗涤溶剂的体积。
  解决方法:降低洗涤溶剂的强度。
  原因8:洗脱液体积太小
  解决方法:增加洗脱液的体积。
  · 在用反相SPE柱萃取时,洗脱馏分中有水
  原因:目标物化合物洗脱之前SPE柱没有很好地干燥
  解决方法:用氮气或空气干燥SPE柱:用20~100μL含60%-90%甲醇-水将SPE柱上的残留水分除去。
  · SPE柱流速降低或者阻塞
  原因1:样品存在过多的颗粒
  解决方法:对样品进行过滤或者离心。
  原因2:样品溶液粘度太大
  解决方法:用溶剂对样品进行稀释。
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